Bu ELISA formatında, antijen ya da protein mikrotitrasyon plakasının kuyucuklarının yüzeyine (solid faz) kaplanır. Antijenleri tespit etmek için, enzim ile işaretlenmiş spesifik antikorlar eklenir. Bağlanmayan unsurlar yıkanıp uzaklaştırılınca, enzime spesifik bir substrat eklenir. Substratın parçalanmasıyla bir renk oluşur ve rengin koyuluğu, örnekte bulunan antijen miktarıyla orantılıdır.
Bu ELISA formatında, antijen ya da protein mikrotitrasyon plakasının kuyucuklarının yüzeyine (solid faz) kaplanır. Antijenleri tespit etmek için, enzim ile işaretlenmiş spesifik antikorlar eklenir. Bağlanmayan unsurlar yıkanıp uzaklaştırılınca, enzime spesifik bir substrat eklenir. Substratın parçalanmasıyla bir renk oluşur ve rengin koyuluğu, örnekte bulunan antijen miktarıyla orantılıdır.
Bu test formatı direkt ELISA’ya benzer fakat bu test yapılırken enzim-işaretli sekonder antikor kullanılır. Mikrotitrasyon plakasındaki kuyucuklara (solid faz) kaplanan antijenlere bağlanan primer antikorları tespit etmek için, primer antikorlara spesifik olan skonder antikorlar kullanılır. Daha sonrasında, substrat eklenerek oluşan renk yoğunluğu, plaka okuyucu spektrofotometre ile ölçülür. Bazı indirekt ELISA formatlarında, primer antikorların yerini hastanın serumundaki antikorların alması sağlanır. Böylece, bu serum örneğinde, antijene spesifik antikorların varlığı tespit edilir. Seroloji çalışmalarında, bakteriyel, viral ve parazitik antijenler plakanın yüzeyine kaplanarak, spesifik antikorların varlığı belirlenir.
Bu test formatı direkt ELISA’ya benzer fakat bu test yapılırken enzim-işaretli sekonder antikor kullanılır. Mikrotitrasyon plakasındaki kuyucuklara (solid faz) kaplanan antijenlere bağlanan primer antikorları tespit etmek için, primer antikorlara spesifik olan skonder antikorlar kullanılır. Daha sonrasında, substrat eklenerek oluşan renk yoğunluğu, plaka okuyucu spektrofotometre ile ölçülür. Bazı indirekt ELISA formatlarında, primer antikorların yerini hastanın serumundaki antikorların alması sağlanır. Böylece, bu serum örneğinde, antijene spesifik antikorların varlığı tespit edilir. Seroloji çalışmalarında, bakteriyel, viral ve parazitik antijenler plakanın yüzeyine kaplanarak, spesifik antikorların varlığı belirlenir.
Bu tip ELISA’da, antijen iki antikor (her biri antijen üzerindeki epitopların birine spesifiktir) arasında sandviç edilir. Bu testi yapmak için, mikrotitrasyon plakası yakalama antikoru ile kaplanır. Daha sonra numune solüsyonu eklenince, antijen yakalama antikoruna bağlanır. Yıkamayı takiben enzim ile işaretli detektör antikor eklenir. Eğer numunede antijen varsa detektör antikor antijene bağlanır. Enzime özgü substrat eklenerek antijen varlığı tespit edilir.
Bu tip ELISA’da, antijen iki antikor (her biri antijen üzerindeki epitopların birine spesifiktir) arasında sandviç edilir. Bu testi yapmak için, mikrotitrasyon plakası yakalama antikoru ile kaplanır. Daha sonra numune solüsyonu eklenince, antijen yakalama antikoruna bağlanır. Yıkamayı takiben enzim ile işaretli detektör antikor eklenir. Eğer numunede antijen varsa detektör antikor antijene bağlanır. Enzime özgü substrat eklenerek antijen varlığı tespit edilir.
Tüm ELISA testleri yarışmalı hale getirilebilir. Buradaki yarışmalı ELISA’da, enzim ile işaretlenmiş antijen ile numunedeki işaretlenmemiş antijen spesifik antikora bağlanmak için birbirleriyle yarışır. Hangi antijen daha çok ise, o antijen antikorlara daha çok sayıda bağlanır. Kantifikasyon için enzime özgü substrat eklenir. Ne kadar çok enzim varsa, o kadar koyu bir renk oluşur. Bu test formatında, renk yoğunluğu ile numunedeki antijen miktarı arasında ters orantı vardır.
Tüm ELISA testleri yarışmalı hale getirilebilir. Buradaki yarışmalı ELISA’da, enzim ile işaretlenmiş antijen ile numunedeki işaretlenmemiş antijen spesifik antikora bağlanmak için birbirleriyle yarışır. Hangi antijen daha çok ise, o antijen antikorlara daha çok sayıda bağlanır. Kantifikasyon için enzime özgü substrat eklenir. Ne kadar çok enzim varsa, o kadar koyu bir renk oluşur. Bu test formatında, renk yoğunluğu ile numunedeki antijen miktarı arasında ters orantı vardır.
Alternatif olarak, solid faza kaplanan (immobilize edilen) antijen ile likit fazdaki (numunedeki) serbest yarışan antijen, spesifik antikora bağlanmak için yarışırlar. Numunedeki antijen ne kadar çok ise, enzim-işaretli antikor solid faza o kadar az bağlanır. Yıkama sonrasında, substrat eklendiğinde koyu bir renk oluşmaz. Yani numunedeki antijen konsantrasyonu ile oluşan renk arasında ters orantı vardır.
Alternatif olarak, solid faza kaplanan (immobilize edilen) antijen ile likit fazdaki (numunedeki) serbest yarışan antijen, spesifik antikora bağlanmak için yarışırlar. Numunedeki antijen ne kadar çok ise, enzim-işaretli antikor solid faza o kadar az bağlanır. Yıkama sonrasında, substrat eklendiğinde koyu bir renk oluşmaz. Yani numunedeki antijen konsantrasyonu ile oluşan renk arasında ters orantı vardır.
